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牛源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用说明
点击次数:1573 发布日期:2018-4-16  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

牛源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

◆ 产品说明

 物种鉴定系列可针对食品、饲料等样品中动物源性成分的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于牛源性成分的检测,出限为0.1%

产品组成(48测试)

021022M

试剂

含量

A-牛源-P

1000μL × 1支

NG-P

 100μL × 2支

PG-牛源-P

 100μL × 1支

◆ 适用仪器

    荧光PCR仪(ABI 7500,CFX 96,Mx 3005P,LineGene9600)等PCR扩增仪。

 自备耗材和仪器

    ①灭菌1.5mL或2.0mL离心管;②灭菌0.2mL PCR管或八联管;③冰盒;④移液器(1-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴。

◆ 注意事项

1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。

   1)第一区:试剂准备区。

   2)第二区:样本制备区。

   3)第三区:扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,使用移液器,试验产生的所有废弃物及时处理。

3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心30秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。

6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。

◆ 样品处理

参照《SB/T 10923-2012 肉及肉制品中动物源性成分的测定 实时荧光PCR法》或其他标准处理样品,制备的样本保存待用。

样品的采集和制备是动物源性鉴别的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应经160℃干烤2 h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用1%次氯酸钠溶液浸泡。

取样应尽量采取肌肉组织,对于同一批样品,应多点采集合并后,作为一份样品进行均质,提取DNA。

采样过程应快速完成,将采取的样品迅速放入组织搅碎机中进行均质成糜状,充分混匀,取0.1 g充分混匀的样品,采用液氮研磨或均质器均质。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

 

◆ 实验操作

将试剂完全解冻,各组分离心30s。

1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):

若有N个待检样品,则参照下表,按照N+2个数量计算反应液用量(N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照),涡旋混匀,离心30s,分装于0.2mL PCR管中。

 

试剂

使用量

A-牛源-P

20×(N+2)μL

反应液总体积

20×(N+2)μL

 

2.模板制备(样本制备区)

   建议使用试剂配套动物源性成分DNA提取系列产品,具体过程详见产品说明书。

3.添加模板(样本制备区,放置于冰盒中进行)

   在步骤1中已含有反应液的PCR管中加入5μL模板,顺序为NG-P、待测样品模板、PG-牛源-P。涡旋混匀30s,离心1min,立即进行PCR扩增反应。

4. 扩增反应(扩增及产物检测区)

   使用荧光定量PCR仪,荧光基团选择FAM,淬灭基团选择TAMRA。

   按下列条件设置扩增反应:

 

PCR循环

荧光收集位点

  95℃  

10分钟

1个循环

  95℃   

15秒

40个循环

  60℃   

1分钟

5.基线和阈值设定

  基线调整取3-15个循环的荧光信号,阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点

 结果判定

检测样品无Ct值,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可报告样品阴性,不含有牛源性成分或含量低于检测限;

检测样品Ct≤35,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有牛源性成分;

检测样品Ct>35,可直接报告样品阴性,不含有牛源性成分或含量低于检测限。

  • NG反应为平滑直线,PG反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆ 企业信息

上海一基实业有限公司

电话:021-61119791

来源:上海一基实业有限公司
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